domingo, 29 de diciembre de 2019

Terapia Regenerativa con Stem Cells en la Influenza



Las células madre distales que expresan p63 (+) Krt5 (+) son esenciales para la regeneración pulmonar en respuesta al daño pulmonar inducido por la influenza.

Tipo de Stem Cells:
Somática: células madre distales de las vías respiratorias (DASC p63 / Krt5 y TBSC p63 / Krt5)
Método de Obtención:
  • Aislar las células madre de las vías respiratorias, se recogieron de la tráquea (TBSCs) y del pulmón (DASCs) de ratones adultos y se sumergieron en tampón de lavado en frío (medio F12, 1% Pen / Strep, 5% FBS).
  • Se digiere con tampón de disociación (F12 / DMEM, 1mg de proteasa ml, 0,005% de tripsina y 10 ng ml21 de ADNasa I)
  • Las células disociadas se cultivaron en células alimentadoras 3T3 irradiadas
  • Las colonias de células individuales fueron recogidas mediante anillos de clonación.
  • Células de TBSCs y DASCs diferenciados in vitro
  • Para activar los genes (lacZ) en TBSCs y DASCs clonados se expuso las colonias in vitro a 4-OH-tamoxifeno
  • Trasplante de células madre en el pulmón en ratones adultos

Resultados:
A corto plazo se logró generar colonias de células madre distales de las vías respiratorias con autorenovación a partir de tres ratones de 0 dpi
A medio plazo se espera propagar la capacidad de estas células manteniendo su compromiso de linaje intrínseco trabajando con células humanas.
A largo plazo se proyecta terapias basadas en células madre para enfermedades pulmonares agudas y crónicas.

BIBLIOGRAFÍA:

Zuo WZhang T, Wu DZGuan SPLiew AA i, p63(+)Krt5(+) distal airway stem cells are essential for lung regeneration.






miércoles, 18 de diciembre de 2019


Transgénico para Neumonía por virus de la Influenza


Los pollos transgénicos que expresan la proteína de fragmento variable de cadena única 3D8 suprimen la transmisión de la influenza aviar.

Se realizó modificaciones genéticas para controlar la IA en aves de corral, mediante la introducción de un gen personalizado para una mayor afinidad por las nucleoproteínas de la IA. Generando una una línea de animales transgenicos que expresan un gen. Los embriones de pollo knock-in se microinyectaron con un vector lentiviral scFv-HA-IRES para generar pollos transgénicos, gen scFv 3D8 bajo el control del promotor de la β-actina de pollo.

Uso:
El experimento de desafío reveló que los pollos transgénicos expuestos al contacto que expresaban scFv 3D8 exhibían una eliminación viral suprimida. Estos resultados sugieren que los pollos transgénicos desarrollados en este estudio podrían ser útiles para controlar la posible transmisión de AIV dentro de la bandada.


Análisis de transferencia Southern de los pollos transgénicos. Se extrajeron muestras de ADN genómico de muestras de sangre completa de pollos de tipo salvaje y transgénicos (G1 y G2), se digirieron con EcoRV, se sometieron a electroforesis

5 Ventajas y 5 Desventajas de los Transgénicos.
VENTAJAS
DESVENTAJAS
1.        Control de vectores
1.       Reducción de eficiencia en antibióticos
2.       Creación de fármacos y vacunas
2.       Alergias, intolerancias y enfermedades autoinmunes
3.       Alimentos con mayor carga nutritiva
3.       Invasión de ecosistemas
 Desarrollo de biomodelos para evaluación de nuevas terapias y patogenia de enfermedades 
4.       A largo plazo las plagas generan resistencia
5.       Mayor resistencia a los insectos
5.       Modificación genética de virus dando lugar a nuevas enfermedades




BIBLIOGRAFIA:

 Byun S , Yuk S , Jang Y , Choi J , Jeon K , Pollos transgénicos que expresan la proteína del fragmento variable de cadena sencilla 3D8 suprimen la transmisión de la gripe aviar [Internet]. Nature.com. 2017 [cited 18 December 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5517518/


Wang S, Chen C, Yang Z, Chi X, Zhang  J, Chen Ji, Targeted disruption of influenza A virus hemagglutinin in genetically modified mice reduces viral replication and improves disease outcome, [Internet]. Nature.com. 2016 [cited 18 December 2019]. Available from: https://www.nature.com/articles/srep23746

Reyes M, Rozowski J, Alimentos transgénicos, [Internet].scielo. 2016 [cited 18 December 2019]. Available from:  https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-75182003000100003


sábado, 14 de diciembre de 2019








La producción de "VACUNAS RECOMBINANTES CONTRA LA INFLUENZA", como el FLUBLOK   que se da mediante la extracción de células del gusano cogollero del maíz alterando la producción de HA, que es la proteína más inmunogénica, capaz de originar una respuesta protectora contra la influenza, luego, esa proteína se expresa en un sistema heterólogo, donde el insecto manifestando el gen que pertenece al virus. con el  ADN recombinante ya no es necesario manejar el virus de la influenza vivo.























BIBLIOGRAFÍA:
  1. Griffiths A, Miller J, Suzuki D, Lewontin R, Gelbart W. Transduction [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2019 [cited 14 December 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21760/?redirect-on-error=__HOME__
  2. Los CDC confirman un 6° y 7° caso de virus de la influenza A H3N2 de origen porcino con el gen M del virus H1N1 2009 [Internet]. Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades, Centro Nacional de Vacunación y Enfermedades. 2011 [cited 10 December 2019]. Available from: https://espanol.cdc.gov/enes/flu/spotlights/swine-origin-indiana.htm
  3.  Intención de recibir la vacuna monovalente contra la influenza A (H1N1) 2009 y la vacuna contra la influenza estacional --- Dos condados, Carolina del Norte, agosto de 2017 [Internet]. Cdc.gov. 2017 [cited 14 December 2019]. Available from: https://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm5850a1_ensp.htm
  4. Palomares L. UNAM-IBT. Dra. Laura Palomares. LAMMB. Vacunas Recombinantes [Internet]. Youtube.com. 2018 [cited 14 December 2019]. Available from: https://www.youtube.com/watch?v=nrLChKIcQA0&feature=youtu.be



jueves, 5 de diciembre de 2019



Recombinación de ácidos nucléicos que suceden en la naturaleza (sin que haya intervenido la manipulación humana)



ADN recombinante permite introducir en el ADN de un organismo un fragmento de interés procedente de otro organismo donante. Permitiéndonos identificar genes y productos que median la inmunidad y resistencia a medicamentos, transferidos por genes o formas mutadas de los genes en agentes causales o huéspedes sustitutos, por fásmidas lanzadera, moléculas quiméricas que se replican en E. coli como plásmidos y en micobacterias como micobacteriófagos, actúa en el desarrollo de sistemas de transferencia génica



BIBLIOGRAFÍA:

  1. Ping X e. Generation of a broadly reactive influenza H1 antigen using a consensus HA sequence. - PubMed - NCBI [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2019 [cited 5 December 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29960799
  2. Jacobs W. Transferencia génica en Mycobacterium tuberculosis : Phasmids del transbordador a la iluminación [Internet].  cbi.nlm.nih.gov. 2014 [citado 5 Diciembre 2019]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4725585/


sábado, 30 de noviembre de 2019








Secuenciación de microarrays de miARN: Están expresados ​​exclusivamente en los virus con potencial de capacidad infecciosa humana, determinando la expresión de 4 miRNAs (hsa-miR-96-5p, hsa-miR-140-5p, hsa-miR-30a-3p y hsa-miR-582-5p) y 5 mRNA relevantes (RCC1, ERVFRD-1, RANBP1, SCARB2 y RPS29) . 



El microarray de miARN y el análisis cuantitativo por PCR mostraron que varios miARN, encontró que miR-21-3p que promueve la virulencia.

BIBLIOGRAFÍA:

  1. 1.   Xia B , Lu J  , Wang R  , Yang Z  , Zhou X  , Huang P . Integration analysis of a miRNA-mRNA expression in A549 cells infected with a novel H3N2 swine influenza virus and the 2009 H1N1 pandemic influenza... - PubMed - NCBI [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2019 [cited 31 December 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/31207403
  2. 2.    Xia B , Lu J  , Wang R  , Yang Z  , Zhou X  , Huang P. miR-21-3p Regulates Influenza A Virus Replication by Targeting Histone Deacetylase-8. PubMed - NCBI [Internet]. Ncbi.nlm.nih.gov. 2019 [cited1 1 December 2019]. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29888214


sábado, 23 de noviembre de 2019


PRUEBAS MOLECULARES PARA LA INFLUENZA A H1N1

Western Blot: Prueba inmunotransferencia para detectar  las principales proteínas de la envoltura viral, identificando el NCL (Unida a la hemaglutinina viral) en la fracción de proteína de membrana celular biotinilada unida por influenza A .


MICROARRAY: Detección y subtipificación del virus de la influenza A. el microarray IAVchip DNA demuestra una mayor eficacia diagnóstica temprana (99,45%) 


BIBLIOGRAFÍA:
1.      NCBI. Comparative Evaluation of Effectiveness of IAVchip DNA Microarray in Influenza A Diagnosis. [Internet]. [Publicado 23 noviembre 2018; citado 23 noviembre 2019]. Disponible en:  https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4274914/
2.      Hemagglutinin of influenza A virus binds specifically to cell surface nucleolin and plays a role in virus internalization. [Internet]. [Publicado julio 2016; citado 23 noviembre 2019]. Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0042682216300654

sábado, 16 de noviembre de 2019





T: Reverse transcription recombinase polymerase amplification with lateral flow dipsticks for detection of influenza A virus and subtyping of H1 and H3.

O: Identificar correctamente el virus de la influenza A H1N1 mediante el PCR en tiempo real, para así mejorar en el diagnóstico temprano y dar un tratamiento adecuado.

MExudados faríngeos usando hisopos Virocult

ADN: ADNc (Complementario) y ARN viral

G:  H1 Y H3

Ex:

Lisis: ácido nucleico viral se extrajo de 140 ul de medio de transporte viral
Separación:
químico: usando 50 ul de tapón de elución utilizando el virus TIANamp ADN ARN Kit

 

PCR: PCR en tiempo real.

 

TIEMPO

CICLOS

Desnaturalización

95 ° C

30 s

30 ciclos

Hibridación

72 ° C

30 s

30 ciclos

Elongación

72 ° C

30 s

30 ciclos

 

V: Electroforesis

Sensibilidad: 5%, 93.33% y 71.43% para la matriz, H1 y H3

Especificidad:  100%



BIBLIOGRAFÍA:

  1. Sun, N., Wang, W., Wang, J., Yao, X., Chen, F., Li, X., … Chen, B. (2018). Reverse transcription recombinase polymerase amplification with lateral flow dipsticks for detection of influenza A virus and subtyping of H1 and H3. Molecular and Cellular Probes, [Internet]. [Publicado diciembre 2018; citado 17 noviembre 2019]. Disponible en: http://sci-hub.tw/10.1016/j.mcp.2018.10.004#

domingo, 10 de noviembre de 2019

PRUEBA DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA


Prueba de tamizaje para la influenza
Hisopado nasofaríngeo:Frote con el hisopado en el área de la nasofaringe y se procesa utilizando un método sensitivo, con una Sensibilidad: 50-70% y Especificidad: 90% al 95%




Prueba confirmatoria para la influenza
La prueba confirmatoria es por PCR (Reacción en cadena de la polimerasa), en una muestra biológica: Exudado faríngeo que expresa una Sensibilidad: 97% y Especificidad: 100%



BIBLIOGRAFÍA:


  1. Bonilla, A. Influenza A, laboratorio clínico. Galenus, revista para los médicos.[Internet]. [Publicado  2019; citado 09 noviembre 2019]Disponible en: http://www.galenusrevista.com/Influenza-A-H1N1.html
  2. CDC. Información para los médicos sobre las pruebas rápidas de la influenza.[Internet]. [Publicado  05 septiembre 2017; citado 09 noviembre 2019], Disponible en: https://espanol.cdc.gov/enes/flu/professionals/diagnosis/rapidclin.htm

sábado, 2 de noviembre de 2019





El sistema respiratorio es vulnerable a la interacción gene/ ambiental presenta antioxidantes de defensa que incluye enzimas metabólicas como la superóxido dismutasa y la familia de la glutation-S-transferasa, que detoxifican los productos de la inflamación potencialmente dañinos. Los efectos tóxicos como el hábito tabáquico materno y el estrés psicológico materno(aumenta los niveles de IgE en el cordón umbilical).


Bibliografía:

  1. ·         Pociask, D. A., Robinson, K. M., Chen, K., McHugh, K. J., Clay, M. E., Huang, G. T., … Alcorn, J. F. (2017). Epigenetic and Transcriptomic Regulation of Lung Repair during Recovery from Influenza Infection. The American Journal of Pathology, 187(4), 851–863, [Internet]. [Publicado 21 diciembre 2017; citado 02 noviembre 2019]. Disponible en: http://sci-hub.tw/10.1016/j.ajpath.2016.12.012#
  2. ·         Wu, W., Zhang, W., Booth, J. L., Hutchings, D. C., Wang, X., White, V. L., … Metcalf, J. P. (2016). Human primary airway epithelial cells isolated from active smokers have epigenetically impaired antiviral responses. Respiratory Research, 17(1), [Internet]. [Publicado 2016; citado 02 noviembre 2019]. Disponible en: http://sci-hub.tw/10.1186/s12931-016-0428-2